植物組織培養(yǎng)(planttissueculture)是指植物的任何器官、組織或細(xì)胞,在人工預(yù)知的控制條件下,放在含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)等組成的培養(yǎng)基中,使其生長(zhǎng)、分化形成完整植株的過(guò)程。植物組織培養(yǎng)具有取材少,培養(yǎng)材料經(jīng)濟(jì);人為控制培養(yǎng)條件,不受自然條件影響;生長(zhǎng)周期短,養(yǎng)殖率高;管理方便,利于自動(dòng)化控制等特點(diǎn)。因而被廣泛應(yīng)用于各種植物的快速養(yǎng)殖之中。
培養(yǎng)基母液,也叫濃縮貯備液。它是以培養(yǎng)基配方配制成的高倍的濃縮液,不同組分母液,它的濃縮倍數(shù)不同,一般最低為10倍,高的有50倍、100倍、200倍,甚至1000倍。母液是一個(gè)方法比較簡(jiǎn)便、用量比較準(zhǔn)確且被廣泛采用的配制方法。本文就如何掌握培養(yǎng)基母液配制的操作要領(lǐng)作一闡述,以供參考。
培養(yǎng)基母液,也叫濃縮貯備液。它是以培養(yǎng)基配方配制成的高倍的濃縮液,不同組分母液,它的濃縮倍數(shù)不同,一般最低為10倍,高的有50倍、100倍、200倍,甚至1000倍。母液是一個(gè)方法比較簡(jiǎn)便、用量比較準(zhǔn)確且被廣泛采用的配制方法。本文就如何掌握培養(yǎng)基母液配制的操作要領(lǐng)作一闡述,以供參考。
以MS培養(yǎng)基為例,其母液的配制包括大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素、氨基酸、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)和有機(jī)附加物等種類(lèi)。
按規(guī)定用量,稱(chēng)取所需的各種藥品,在配制時(shí)為減少工作量,可以把幾種藥品(如大量元素或微量元素)配在同一母液中(見(jiàn)表1)。
但由于各種藥品的混合,可能發(fā)生反應(yīng),生成沉淀物,以致母液失效。為避免類(lèi)似現(xiàn)象發(fā)生,在大量元素、微量元素和維生素及氨基酸的母液配制時(shí),可采用如下2種做法加以解決:①將要配在同一母液的大量元素、微量元素和維生素及氨基酸等化合物,按“表1”所列藥品的先后順序溶解藥品,待前一種藥品完全溶解后再加入后一種化學(xué)藥品,以此類(lèi)推;②使每種成份分別完全溶解,再把它們彼此混合。
2、鐵鹽母液的配制
鐵鹽的成份含硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)和乙二胺四乙酸二鈉(Na2-EDTA).這兩種化合物的溶解和混合較為嚴(yán)格,必須按如下方法配制,否則將會(huì)產(chǎn)生沉淀.該方法是:分別溶解FeSO4·7H2O和Na2-EDTA,加熱并不斷攪拌,使之完全溶解,冷卻,將2種溶液混合,調(diào)PH至5.5,用蒸溜水加至所需容積,棕色瓶保存于冰箱之中。
3、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液的配制
植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)是培養(yǎng)基的重要組分之一,一般是植物激素類(lèi)物質(zhì),如生長(zhǎng)素類(lèi)的IAA、IBA、NAA,赤霉素類(lèi)的GA3,細(xì)胞分裂素類(lèi)的2,4-D、KT和6-BA等.由于大多數(shù)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)難溶于水,因此配制方法也各不相同:①I(mǎi)AA,IBA和GA3先用少量95%酒精溶解,再加水定容,搖勻后貯于試劑瓶中、貼上標(biāo)簽后,存放在冰箱中;②NAA可用熱水或少量95%酒精溶解,再加水定容至所需容積;③2,4-D可溶于少許1mol·L-1的NaOH溶液中,然后加水定容;④KT和6-BA可用少量1mol·L-1的HCl溶解,再加水定容;⑤玉米素先溶于少量95%酒精中,然后加水定容。
植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)濃度通常用ppm(mg·ml-1)和mol·L-1表示,在配制母液時(shí),常以ppm較為方便,一般配制成0.5ppm的母液,這個(gè)濃度既便于計(jì)算,也可避免冷藏時(shí)形成結(jié)晶.
4、有機(jī)附加物母液的配制
在植物組織培養(yǎng)時(shí),培養(yǎng)基中往往要加入一些有機(jī)附加物,如椰子汁,以促進(jìn)組織培養(yǎng)活性。由于椰子汁的活性成分是耐熱的,在配制時(shí),要先把由果實(shí)中采集到的汁液加熱煮沸以除去其中的蛋白質(zhì),過(guò)濾,然后置塑料瓶中貯存于的-200c的低溫冰箱內(nèi)。
2、鐵鹽母液的配制
鐵鹽的成份含硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)和乙二胺四乙酸二鈉(Na2-EDTA).這兩種化合物的溶解和混合較為嚴(yán)格,必須按如下方法配制,否則將會(huì)產(chǎn)生沉淀.該方法是:分別溶解FeSO4·7H2O和Na2-EDTA,加熱并不斷攪拌,使之完全溶解,冷卻,將2種溶液混合,調(diào)PH至5.5,用蒸溜水加至所需容積,棕色瓶保存于冰箱之中。
3、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液的配制
植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)是培養(yǎng)基的重要組分之一,一般是植物激素類(lèi)物質(zhì),如生長(zhǎng)素類(lèi)的IAA、IBA、NAA,赤霉素類(lèi)的GA3,細(xì)胞分裂素類(lèi)的2,4-D、KT和6-BA等.由于大多數(shù)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)難溶于水,因此配制方法也各不相同:①I(mǎi)AA,IBA和GA3先用少量95%酒精溶解,再加水定容,搖勻后貯于試劑瓶中、貼上標(biāo)簽后,存放在冰箱中;②NAA可用熱水或少量95%酒精溶解,再加水定容至所需容積;③2,4-D可溶于少許1mol·L-1的NaOH溶液中,然后加水定容;④KT和6-BA可用少量1mol·L-1的HCl溶解,再加水定容;⑤玉米素先溶于少量95%酒精中,然后加水定容。
植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)濃度通常用ppm(mg·ml-1)和mol·L-1表示,在配制母液時(shí),常以ppm較為方便,一般配制成0.5ppm的母液,這個(gè)濃度既便于計(jì)算,也可避免冷藏時(shí)形成結(jié)晶.
4、有機(jī)附加物母液的配制
在植物組織培養(yǎng)時(shí),培養(yǎng)基中往往要加入一些有機(jī)附加物,如椰子汁,以促進(jìn)組織培養(yǎng)活性。由于椰子汁的活性成分是耐熱的,在配制時(shí),要先把由果實(shí)中采集到的汁液加熱煮沸以除去其中的蛋白質(zhì),過(guò)濾,然后置塑料瓶中貯存于的-200c的低溫冰箱內(nèi)。
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