將誘導(dǎo)產(chǎn)生的芽、苗、愈傷組織、原球莖或胚狀體等培養(yǎng)物重新分割，接種到新鮮培養(yǎng)基上進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)的過程稱為繼代培養(yǎng)，也稱為增殖培養(yǎng)。該過程是植物組織培養(yǎng)中決定養(yǎng)殖速度快慢、養(yǎng)殖系數(shù)高低的關(guān)鍵階段。繼代使用的培養(yǎng)基對于一種植物來說，每次幾乎完全相同。由于培養(yǎng)物在適宜的環(huán)境條件、充足的營養(yǎng)供應(yīng)和生長調(diào)節(jié)劑作用下，排除了其他生物的競爭，養(yǎng)殖速度大大加快。

    1、繼代增殖方式
    根據(jù)外植體分化和生長的方式不同，繼代培養(yǎng)中培養(yǎng)物的增殖方式也各不相同。主要的增殖方式有：
    （1）多節(jié)莖段增殖
    將頂芽或腋芽萌發(fā)伸長形成的多節(jié)莖段嫩枝，剪成帶1~2枚葉片的單芽或多芽莖段，接種到繼代培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的方法。該方法培養(yǎng)過程簡單，適用范圍廣，移栽容易成活，遺傳性狀穩(wěn)定，如馬鈴薯、葡萄、刺槐、山芋等即可此種方式增殖。
    （2）叢生芽增殖
    將頂芽或腋芽萌發(fā)形成的叢生芽分割成單芽，接種到繼代培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的方法。該方法不經(jīng)過愈傷組織的再生，是最能使無性系后代保持原品種特性的一種增殖方式，而且成苗速度快，養(yǎng)殖量大，適合于大規(guī)模的商業(yè)化生產(chǎn)。
    （3）不定芽增殖
    將能再生不定芽的器官或愈傷組織塊分割，接種到繼代培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的方法。不定芽形成的數(shù)量與腋芽無關(guān)，其增殖率高于叢生芽方式。但是通過這種方式再生的植株在遺傳上的穩(wěn)定性較差，而且隨著繼代次數(shù)的增加，愈傷組織再生植株的能力會下降，甚至完全消失。
    （4）原球莖增殖
    將原球莖切割成小塊，也可以給予針刺等損傷，或在液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)，來加快其增殖進(jìn)程。
    （5）胚狀體增殖
    通過體細(xì)胞胚的發(fā)生來進(jìn)行無性系的大量養(yǎng)殖。具有極大的潛力，其特點是成苗數(shù)量多、速度快、結(jié)構(gòu)完整，因而是增殖系數(shù)最大的一種方式。但胚狀體發(fā)生和發(fā)育情況復(fù)雜，通過胚狀體途徑養(yǎng)殖的植物種類遠(yuǎn)沒有叢生芽和不定芽涉及的廣泛。
    一種植物的增殖方式不是固定不變的，有的植物可以通過多種方式進(jìn)行無性擴(kuò)繁。如葡萄可以通過多節(jié)莖段和叢生芽方式進(jìn)行養(yǎng)殖；蝴蝶蘭可以通過原球莖和叢生芽方式進(jìn)行養(yǎng)殖。生產(chǎn)中，具體應(yīng)用哪一種方式進(jìn)行，主要看他們的增殖系數(shù)、增殖周期、增殖后芽的穩(wěn)定性及適宜生產(chǎn)操作等因素而定。 
    2、影響繼代增殖的因素
    （1）植物材料
    不同種類的植物，同種植物不同品種，同一植物不同器官和不同部位，繼代紡織能力也各不相同。一般是草本>木本；被子植物>裸子植物；年幼材料>老年材料；剛分離組織>已繼代的組織；胚>營養(yǎng)組織；芽>胚狀體>愈傷組織。在以腋芽或不定芽增殖繼代的植物中，在培養(yǎng)許多代之后仍然保持著旺盛的增殖能力，一般較少出現(xiàn)再生能力喪失。
    （2）培養(yǎng)基
    在規(guī)?；a(chǎn)中，培養(yǎng)的植物品種一般比較多，而且來源也比較復(fù)雜，品種間的差異表現(xiàn)非常明顯。在培養(yǎng)基的配制和使用上，一定要多樣化，否則會造成一些品種因為生長調(diào)節(jié)劑過高或過低而嚴(yán)重影響?zhàn)B殖和生長。另外，在同一品種上，適當(dāng)調(diào)整培養(yǎng)基中生長調(diào)節(jié)劑的濃度也是非常重要的，其目的的主要是為了保證種苗的質(zhì)量，同時又可以維持一定的養(yǎng)殖基數(shù)。
    一些植物經(jīng)長期繼代培養(yǎng)，在開始繼代培養(yǎng)中需要加入生長調(diào)節(jié)劑，經(jīng)過幾次繼代后，加入少量或不加生長調(diào)節(jié)劑也可以生長。如在胡蘿卜搏壁組織初代培養(yǎng)中加入10-6mol/LIAA才能達(dá)到最大生長量，但在繼代培養(yǎng)10代以后，不加IAA的培養(yǎng)基上也可達(dá)到同樣生長量。在蘭科植物原球莖繼代培養(yǎng)中情況也相同。
    （3）培養(yǎng)條件
    培養(yǎng)溫度應(yīng)大致與該植物原產(chǎn)地生長所需的最適溫度相似。喜歡冷涼的植物，以20℃左右較好，熱帶作物需在30℃左右的條件下才能獲得較好的生長。如香石竹在18-25℃隨溫度降低生長速度減慢，但苗的質(zhì)量顯著提高，玻璃化現(xiàn)象減少，高于25℃時，引起苗徒長細(xì)弱，玻璃化或半玻璃化苗明顯增加。另在桉樹繼代培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，如果總在23-25℃條件下培養(yǎng)，芽就會逐漸死亡，但如果每次繼代培養(yǎng)時，先在15℃下培養(yǎng)3d，再轉(zhuǎn)至25℃下培養(yǎng)，生長良好。
    （4）繼代周期
    對一些生長速度快或者養(yǎng)殖系數(shù)高的種類如滿天星、非洲紫羅蘭等，繼代時間比較短，一般不超過15d。對生長速度比較慢的種類如非洲菊、紅掌等，繼代時間就要長一些；30-40d繼代1次。繼代時間也不是一成不變的，要根據(jù)培養(yǎng)目的、環(huán)境條件及所使用的培養(yǎng)基配方進(jìn)行考慮。在前期擴(kuò)繁階段，為了加快養(yǎng)殖速度，當(dāng)苗剛分化時就切割繼代，而無需待苗長到很大時才進(jìn)行繼代。后期在保持一定養(yǎng)殖基數(shù)的前提下，進(jìn)行定量生產(chǎn)時，為了有更多的大苗可以用來生根，可以間隔較長的時間繼代，達(dá)到既可以維持一定的養(yǎng)殖量，又可以提高組培苗質(zhì)量的目的。
    （5）繼代次數(shù)
    繼代次數(shù)對養(yǎng)殖率的影響因培養(yǎng)材料而異。有些植物如葡萄、黑穗醋栗、月季和倒掛金鐘等，長期繼代可保持原來的再生能力和增殖率。有些植物則隨繼代次數(shù)而增加變異頻率，如繼代5次的香蕉不定芽變異頻率為2.14%，繼代10次后為4.2%，因此香蕉組培苗繼代培養(yǎng)不能超過1年。還有一些植物長期繼代培養(yǎng)，會逐漸衰退，喪失形態(tài)發(fā)生能力。具體表現(xiàn)為生長不良，再生能力和增殖率下降等。