菊苣又稱法國苦苣、吉康利、苦白菜等,屬于菊科萵苣屬多年生草本植物,菊苣的嫩葉可以炒食、做湯或做色拉:軟化栽培后的菊苣芽球可用以生吃?;蜃龀甚r美開胃的涼拌菜:歐美等國還有人把菊苣的肉質(zhì)根加工成咖啡的代用品或添加劑。由于菊苣中含馬栗樹皮素、馬栗樹皮甙、野萵苣甙、山萵苣素和山萵苣苦素等苦味物質(zhì),作為蔬菜食用具有促進膽汁分泌、改善睡眠、調(diào)節(jié)新陳代謝等功效,使其成為很受人們歡迎的新興蔬菜。由于受到環(huán)境的影響,過去在北方難以進行栽培,但因近年來市場對菊苣的需求量很大,遼寧南部地區(qū)的農(nóng)民開始進行栽培,在對菊苣的栽培品種——中囤一號進行栽種中,偶爾可以發(fā)現(xiàn)生長非常旺盛、可食嫩葉產(chǎn)量高、適合在遼寧南部地區(qū)栽培的優(yōu)良變異植株,用這種變異植株的種子進行養(yǎng)殖,后代由于性狀分離等原因,有利性狀無法保持。為此,2004年當人們在種植中再次發(fā)現(xiàn)這種優(yōu)良變異植株時,我們采用組織培養(yǎng)的方法對菊苣的優(yōu)良變異植株進行了組織培養(yǎng)及無性系建立的研究,現(xiàn)報道如下:
材料和方法
1.材料及滅菌
將田間生長旺盛、具有有利變異性狀的菊苣采回來后,切去葉片.將葉柄放到磨口瓶中,用自來水沖洗4次后,用0.05%安利洗滌液洗滌30min,洗至無泡沫時置于超凈工作臺上,用75%乙醇滅菌20s后迅速用無菌水洗滌3次,接著用0.1%HgCl2溶液振蕩滅菌1min,再用0.05%HgCl2溶液振蕩滅菌12min,接著用無菌水振蕩洗滌6次。即獲得無菌材料。
2.培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基以MS、1/2MS和1/3MS為基本培養(yǎng)基.附加不同濃度的細胞分裂素BA和生長素IAA、NAA、2,4一D丁酯。以MS為基本培養(yǎng)基時,加蔗糖30g/L:以1/2MS為基本培養(yǎng)基時,加蔗糖15g/L;以1/3MS為基本培養(yǎng)基時,加蔗糖10g/L。培養(yǎng)基胨力強度為180g/cm2,pH值5.8~6.0。培養(yǎng)溫度18~26℃,光照10~12h/d.光照強度2000~3000lx。
3.試驗方法
3.1愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)將無菌葉柄切成0.2cm左右的塊,接種到以MS為基本培養(yǎng)基,附加不同濃度的BA、NAA、IAA和2,4一D丁酯的培養(yǎng)基上.進行愈傷組織的誘導(dǎo),60d后觀察統(tǒng)計。
1.3.2愈傷組織及不定芽的分化培養(yǎng)將在誘導(dǎo)菊苣葉柄形成愈傷組織的理想培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出的葉柄顆粒狀愈傷組織接種到附加不同濃度BA、NAA的l/2MS+AgN0320.5mg/L和l/3MS+AgN0320.5mg/L培養(yǎng)基上,進行愈傷組織的分化培養(yǎng)。
3_3不定芽生根培養(yǎng)將上述分化培養(yǎng)的不定芽從基部剪下.接種到以1/2MS和1/3MS為基本培養(yǎng)基.附加不同濃度IAA、NAA和IBA的生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)到10d時有的培養(yǎng)基上可見形成根原基.培養(yǎng)30d時觀察統(tǒng)計。
3.4試管苗移栽將生根苗培養(yǎng)瓶瓶塞打開,置于光照約5000Lx、溫度20℃左右的條件下煉苗4d后,用鑷子取出,洗去基部培養(yǎng)基,移栽到上面鋪著5~6cm厚不同基質(zhì)的溫室苗床上,20d后觀察統(tǒng)計。
1.材料及滅菌
將田間生長旺盛、具有有利變異性狀的菊苣采回來后,切去葉片.將葉柄放到磨口瓶中,用自來水沖洗4次后,用0.05%安利洗滌液洗滌30min,洗至無泡沫時置于超凈工作臺上,用75%乙醇滅菌20s后迅速用無菌水洗滌3次,接著用0.1%HgCl2溶液振蕩滅菌1min,再用0.05%HgCl2溶液振蕩滅菌12min,接著用無菌水振蕩洗滌6次。即獲得無菌材料。
2.培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基以MS、1/2MS和1/3MS為基本培養(yǎng)基.附加不同濃度的細胞分裂素BA和生長素IAA、NAA、2,4一D丁酯。以MS為基本培養(yǎng)基時,加蔗糖30g/L:以1/2MS為基本培養(yǎng)基時,加蔗糖15g/L;以1/3MS為基本培養(yǎng)基時,加蔗糖10g/L。培養(yǎng)基胨力強度為180g/cm2,pH值5.8~6.0。培養(yǎng)溫度18~26℃,光照10~12h/d.光照強度2000~3000lx。
3.試驗方法
3.1愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)將無菌葉柄切成0.2cm左右的塊,接種到以MS為基本培養(yǎng)基,附加不同濃度的BA、NAA、IAA和2,4一D丁酯的培養(yǎng)基上.進行愈傷組織的誘導(dǎo),60d后觀察統(tǒng)計。
1.3.2愈傷組織及不定芽的分化培養(yǎng)將在誘導(dǎo)菊苣葉柄形成愈傷組織的理想培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出的葉柄顆粒狀愈傷組織接種到附加不同濃度BA、NAA的l/2MS+AgN0320.5mg/L和l/3MS+AgN0320.5mg/L培養(yǎng)基上,進行愈傷組織的分化培養(yǎng)。
3_3不定芽生根培養(yǎng)將上述分化培養(yǎng)的不定芽從基部剪下.接種到以1/2MS和1/3MS為基本培養(yǎng)基.附加不同濃度IAA、NAA和IBA的生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)到10d時有的培養(yǎng)基上可見形成根原基.培養(yǎng)30d時觀察統(tǒng)計。
3.4試管苗移栽將生根苗培養(yǎng)瓶瓶塞打開,置于光照約5000Lx、溫度20℃左右的條件下煉苗4d后,用鑷子取出,洗去基部培養(yǎng)基,移栽到上面鋪著5~6cm厚不同基質(zhì)的溫室苗床上,20d后觀察統(tǒng)計。
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