1、材料與方法
1.1供試材料
1.1.1供試藥劑50%多菌靈可濕性粉劑、70%代森猛鋅可濕性粉劑、Yl一1、57.6%冠菌清干粒劑、50%撲海因懸浮劑、75%百菌清可濕性粉劑。
1.1.2供試菌種微球菌(Micrococcus)、葡萄球菌(Staphylococcus)、棕曲霉、黑曲霉、黑青霉、杜氏青霉都是從被污染的培養(yǎng)植物上分離純化獲得。
1.1.3培養(yǎng)基YEB培養(yǎng)基;PDA培養(yǎng)基。
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1污染細(xì)菌鑒定革蘭氏染色法初步鑒定細(xì)菌。
1.2.2抑菌強(qiáng)度測(cè)定無(wú)菌水稀釋藥劑成1000mg/L。細(xì)菌取0.2mL對(duì)數(shù)期菌懸液(真菌取0.2mL孢子菌懸液(106個(gè)/mL))與20mLYEB(真菌PDA)培養(yǎng)基混勻倒平板.凝固后每一平板置2個(gè)牛津杯(直徑8mm),一杯加O.2mL藥劑,另一杯以無(wú)菌水作對(duì)照,置于28℃溫箱培養(yǎng),葡萄球菌培養(yǎng)24h、微球菌和真菌培養(yǎng)48h后,取出測(cè)抑菌圈直徑。
1.2.3細(xì)菌最低抑菌濃度測(cè)定用無(wú)菌水稀釋藥劑成2000mg/L原液,然后按1:2,1:4,l:8.二稀釋至15.625mg/L,余下均同1.2.2.
1.2.4菌絲生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)用無(wú)菌水配制成106個(gè)/mL孢子懸浮液,分別取0.2mL孢子懸浮液與20mLPDA培養(yǎng)基混勻倒平板,28℃溫箱遮光培養(yǎng)48h后備用.用無(wú)菌水稀釋藥劑成2000mg/L原液,然后配制成1000,500,250……0.9765625mg/L的含藥培養(yǎng)基,對(duì)照為不加藥的培養(yǎng)基。用打孔器(直徑7mm)從備用平板中打取菌餅,菌絲面朝下接種于含藥培養(yǎng)基中央,每平板加一個(gè)菌餅,3次重復(fù),28℃溫箱遮光培養(yǎng),每2d取出測(cè)量菌落直徑。
生長(zhǎng)抑制率(%)={(對(duì)照菌落直徑一菌餅直徑)一(處理菌落直徑一菌餅直徑)/(對(duì)照菌落直徑一菌餅直徑)}*100%
1.2.5袍子萌發(fā)抑制試驗(yàn)將孢子接種于液體PDA中,于28℃、130rad/min搖床上培養(yǎng)24h,雙層紗布過(guò)濾后用無(wú)菌水調(diào)制成104個(gè)/mL備用。用無(wú)菌水稀釋藥劑成2000mg/L的原液,然后配制成1000、250、62.5……0.9765625mg/L的含藥培養(yǎng)基.分別取2mL孢子懸浮液與不同濃度的含藥培養(yǎng)基混勻,3次重復(fù),28℃培養(yǎng),72h后鏡檢計(jì)算孢子萌發(fā)抑制率.
孢子萌發(fā)抑制率(%)={(對(duì)照萌發(fā)率一處理萌發(fā)率)/對(duì)照萌發(fā)率}x100%
1.2.6對(duì)植物生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)與開(kāi)放組培初探用無(wú)菌水配制藥劑成2000mg/L原液,4000rad/min離心10min,上清液用孔徑20nm的濾膜過(guò)濾備用。將濾好的原液與培養(yǎng)基混合配制成1000、250、62.5mg/L的含藥培養(yǎng)基。取健壯的馬鈴薯試管苗剪成小段,接種于上述含藥培養(yǎng)基,對(duì)照為不加藥的培養(yǎng)基,每梯度6瓶,每瓶10株,其中3瓶正常放置,3od后觀察馬鈴薯生長(zhǎng)情況,另外3瓶開(kāi)口放置,20d后觀察馬鈴薯的污染情況。
1.1供試材料
1.1.1供試藥劑50%多菌靈可濕性粉劑、70%代森猛鋅可濕性粉劑、Yl一1、57.6%冠菌清干粒劑、50%撲海因懸浮劑、75%百菌清可濕性粉劑。
1.1.2供試菌種微球菌(Micrococcus)、葡萄球菌(Staphylococcus)、棕曲霉、黑曲霉、黑青霉、杜氏青霉都是從被污染的培養(yǎng)植物上分離純化獲得。
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1污染細(xì)菌鑒定革蘭氏染色法初步鑒定細(xì)菌。
1.2.2抑菌強(qiáng)度測(cè)定無(wú)菌水稀釋藥劑成1000mg/L。細(xì)菌取0.2mL對(duì)數(shù)期菌懸液(真菌取0.2mL孢子菌懸液(106個(gè)/mL))與20mLYEB(真菌PDA)培養(yǎng)基混勻倒平板.凝固后每一平板置2個(gè)牛津杯(直徑8mm),一杯加O.2mL藥劑,另一杯以無(wú)菌水作對(duì)照,置于28℃溫箱培養(yǎng),葡萄球菌培養(yǎng)24h、微球菌和真菌培養(yǎng)48h后,取出測(cè)抑菌圈直徑。
1.2.3細(xì)菌最低抑菌濃度測(cè)定用無(wú)菌水稀釋藥劑成2000mg/L原液,然后按1:2,1:4,l:8.二稀釋至15.625mg/L,余下均同1.2.2.
1.2.4菌絲生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)用無(wú)菌水配制成106個(gè)/mL孢子懸浮液,分別取0.2mL孢子懸浮液與20mLPDA培養(yǎng)基混勻倒平板,28℃溫箱遮光培養(yǎng)48h后備用.用無(wú)菌水稀釋藥劑成2000mg/L原液,然后配制成1000,500,250……0.9765625mg/L的含藥培養(yǎng)基,對(duì)照為不加藥的培養(yǎng)基。用打孔器(直徑7mm)從備用平板中打取菌餅,菌絲面朝下接種于含藥培養(yǎng)基中央,每平板加一個(gè)菌餅,3次重復(fù),28℃溫箱遮光培養(yǎng),每2d取出測(cè)量菌落直徑。
生長(zhǎng)抑制率(%)={(對(duì)照菌落直徑一菌餅直徑)一(處理菌落直徑一菌餅直徑)/(對(duì)照菌落直徑一菌餅直徑)}*100%
1.2.5袍子萌發(fā)抑制試驗(yàn)將孢子接種于液體PDA中,于28℃、130rad/min搖床上培養(yǎng)24h,雙層紗布過(guò)濾后用無(wú)菌水調(diào)制成104個(gè)/mL備用。用無(wú)菌水稀釋藥劑成2000mg/L的原液,然后配制成1000、250、62.5……0.9765625mg/L的含藥培養(yǎng)基.分別取2mL孢子懸浮液與不同濃度的含藥培養(yǎng)基混勻,3次重復(fù),28℃培養(yǎng),72h后鏡檢計(jì)算孢子萌發(fā)抑制率.
孢子萌發(fā)抑制率(%)={(對(duì)照萌發(fā)率一處理萌發(fā)率)/對(duì)照萌發(fā)率}x100%
1.2.6對(duì)植物生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)與開(kāi)放組培初探用無(wú)菌水配制藥劑成2000mg/L原液,4000rad/min離心10min,上清液用孔徑20nm的濾膜過(guò)濾備用。將濾好的原液與培養(yǎng)基混合配制成1000、250、62.5mg/L的含藥培養(yǎng)基。取健壯的馬鈴薯試管苗剪成小段,接種于上述含藥培養(yǎng)基,對(duì)照為不加藥的培養(yǎng)基,每梯度6瓶,每瓶10株,其中3瓶正常放置,3od后觀察馬鈴薯生長(zhǎng)情況,另外3瓶開(kāi)口放置,20d后觀察馬鈴薯的污染情況。
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