魚腥草為三白草科植物蕺菜的全草。其以味似魚腥而得名,是多年生的草本植物,又名側(cè)耳根、臭根草、魚鱗草等,具有清熱解毒,消癰排膿,名利尿通淋等功能,用于痰熱喘咳、熱痢、熱淋、癰腫瘡毒等。其嫩葉、根莖可食用,為長江以南各省區(qū)大眾喜愛的美味。魚腥草具有廣譜的抗菌作用,對免疫功能也有一定的增強(qiáng)效果。目前,魚腥草被國家衛(wèi)生部正式確定為“既是藥品,又是食品”的極具開發(fā)潛力的資源之一。國內(nèi)對魚腥草的分布、栽培、化學(xué)成分、藥理、臨床應(yīng)用及提取成分均有研究,并利用組織培養(yǎng)技術(shù),研究魚腥草再生植株。但在研究過程中魚腥草的外植體易受污染,本研究是通過建立魚腥草的再生植株體系,旨在為魚腥草栽培和開發(fā)利用提供新技術(shù)參數(shù)和理論依據(jù)。
材料與方法
1.1材料魚腥草當(dāng)年生幼嫩的莖段取自安徽省廣德縣。
1.2方法取魚腥草莖段用流動清水沖洗后,采用不同方法對外植體進(jìn)行滅菌處理,對滅菌劑的種類,處理時間等進(jìn)行了細(xì)致的設(shè)計和篩選,共設(shè)計了以下24種不同的滅菌措施。
魚腥草外植體滅菌措施為:第1組70%酒精30s,10%次氯酸鈉8min;第2組70%酒精30s,10%次氯酸鈉10min;第3組70%酒精30s,10%次氯酸鈉10min;第4組70%酒精30s,10%次氯酸鈉20min;第5組70%酒精30s,0.1%升汞5min,第6組70%酒精30s,0.1%升汞8min;第7組70%酒精30s,0.1%升汞10min;第8組70%酒精30s,0.1%升汞12min;第9組70%酒精30s,10%次氯酸鈉8min,青霉素15min;第10組70%酒精30s,10%次氯酸鈉8min,青霉素+鏈霉素15min;第11組70%酒精30s,10%次氯酸鈉10min,青霉素15min;第12組70%酒精30s,10%次氯酸鈉l0min,青霉素十鏈霉素15min;第13組70%酒精30s,10%次氯酸鈉15min,青霉素15min;第14組70%酒精30s,10%次氯酸鈉15min,青霉素+鏈霉素15min;第15組70%酒精30s,10%次氯酸鈉20min,青霉素15min;第16組70%酒精30s,10%次氯酸鈉20min,青霉素+鏈霉素15min;第17組70%酒精30s,0.1%升汞smin,青霉素15min;第18組70%酒精30s,0.1%升汞5min,青霉素+鏈霉素15min;第19組70%酒精30s,0.1%升汞8min,青霉素15min;第20組70%酒精30s,0.1%升汞8min,青霉素+鏈霉素15min;第21組70%酒精30s,0.1%升汞10min,青霉素15min;第22組70%酒精30s,0.1%升汞10min,青霉素+鏈霉素15min;第23組70%酒精30s,0.1%升汞12min,青霉素15min;第24組70%酒精30s,0.1%升汞12min,青霉素+鏈霉素15min。
結(jié)果與分析
2.1滅菌措施對外植體莖的滅菌效果的影響詳見表1。由表1可以看出,經(jīng)過不同的滅菌措施處理的接種材料莖,其滅菌效果差異明顯。滅菌效果好的是第15、16、22、23、24組;但15、16組褐化率較高,分別為75%和91.7%,滅菌效果較好的是第7、8、24組;滅菌效果差的是第1、2、9、10組。綜合滅菌效果和褐化情況,21、22、23、24組滅菌措施對莖段滅菌效果最好。
2.2滅菌措施對外植體莖的菌類侵染的抑制效果各種不同滅菌措施對外植體莖段的菌類的抑制能力如表2所示。在設(shè)計的24組滅菌措施中以16組和24組表現(xiàn)出對材料上菌類的滋生侵染的抑制效果最強(qiáng),接種后一直沒有被污染,污染率是伍其次,抑制菌滋較好的是第4、7、8、15、22、23組,接種后第4d才出現(xiàn)污染,污染率低;抑制菌滋生效果最差的是第l、2、5、9、10、11、12、17、18組,接種第3d出現(xiàn)大量污染,累計污染率為100%。
2.3抗生素對材料滅菌效果的影響根據(jù)第11、12組與第2組滅菌措施的比較,兩組培養(yǎng)基完全相同,第11組用了單獨(dú)青霉素滅菌,而第12組采用青霉素,鏈霉素混合液處理,其他滅菌藥劑,濃度,處理時間均相同。結(jié)果表明,第12組材料滅菌效果略優(yōu)于第2、11組,第13和14與第3組,,第15和16與第4組,19和20與第5組,21和22與第6組,23和24與第7組比較又同樣得出以上結(jié)論。說明青霉素,鏈霉素混合液對外植體滅菌有一定的積極作用,比不用或單獨(dú)用青霉素滅菌效果好。
小結(jié)與討論
根據(jù)上述的研究結(jié)果,對魚腥草組培中無菌培養(yǎng)系建立的具體技術(shù)措施總結(jié):(1)對魚腥草對外植體莖段滅菌效果最佳的處理措施為:外植體+70%酒精30s+0.1%升汞10一12min+青霉素+鏈霉素15min;(2)青霉素和鏈霉素混合液浸泡外植體有一定的滅菌效果,比單獨(dú)用青霉素滅菌效果好。青霉素和鏈霉素混用對菌類滋生的抑制效果好,比單用青霉素對菌類滋生的抑制效果強(qiáng)。(3)魚腥草的外植體莖用升汞滅菌的滅菌效果及對菌類滋生的抑制效果比用10%次氯酸鈉處理效果好。
1.1材料魚腥草當(dāng)年生幼嫩的莖段取自安徽省廣德縣。
1.2方法取魚腥草莖段用流動清水沖洗后,采用不同方法對外植體進(jìn)行滅菌處理,對滅菌劑的種類,處理時間等進(jìn)行了細(xì)致的設(shè)計和篩選,共設(shè)計了以下24種不同的滅菌措施。
魚腥草外植體滅菌措施為:第1組70%酒精30s,10%次氯酸鈉8min;第2組70%酒精30s,10%次氯酸鈉10min;第3組70%酒精30s,10%次氯酸鈉10min;第4組70%酒精30s,10%次氯酸鈉20min;第5組70%酒精30s,0.1%升汞5min,第6組70%酒精30s,0.1%升汞8min;第7組70%酒精30s,0.1%升汞10min;第8組70%酒精30s,0.1%升汞12min;第9組70%酒精30s,10%次氯酸鈉8min,青霉素15min;第10組70%酒精30s,10%次氯酸鈉8min,青霉素+鏈霉素15min;第11組70%酒精30s,10%次氯酸鈉10min,青霉素15min;第12組70%酒精30s,10%次氯酸鈉l0min,青霉素十鏈霉素15min;第13組70%酒精30s,10%次氯酸鈉15min,青霉素15min;第14組70%酒精30s,10%次氯酸鈉15min,青霉素+鏈霉素15min;第15組70%酒精30s,10%次氯酸鈉20min,青霉素15min;第16組70%酒精30s,10%次氯酸鈉20min,青霉素+鏈霉素15min;第17組70%酒精30s,0.1%升汞smin,青霉素15min;第18組70%酒精30s,0.1%升汞5min,青霉素+鏈霉素15min;第19組70%酒精30s,0.1%升汞8min,青霉素15min;第20組70%酒精30s,0.1%升汞8min,青霉素+鏈霉素15min;第21組70%酒精30s,0.1%升汞10min,青霉素15min;第22組70%酒精30s,0.1%升汞10min,青霉素+鏈霉素15min;第23組70%酒精30s,0.1%升汞12min,青霉素15min;第24組70%酒精30s,0.1%升汞12min,青霉素+鏈霉素15min。
結(jié)果與分析
2.1滅菌措施對外植體莖的滅菌效果的影響詳見表1。由表1可以看出,經(jīng)過不同的滅菌措施處理的接種材料莖,其滅菌效果差異明顯。滅菌效果好的是第15、16、22、23、24組;但15、16組褐化率較高,分別為75%和91.7%,滅菌效果較好的是第7、8、24組;滅菌效果差的是第1、2、9、10組。綜合滅菌效果和褐化情況,21、22、23、24組滅菌措施對莖段滅菌效果最好。
2.2滅菌措施對外植體莖的菌類侵染的抑制效果各種不同滅菌措施對外植體莖段的菌類的抑制能力如表2所示。在設(shè)計的24組滅菌措施中以16組和24組表現(xiàn)出對材料上菌類的滋生侵染的抑制效果最強(qiáng),接種后一直沒有被污染,污染率是伍其次,抑制菌滋較好的是第4、7、8、15、22、23組,接種后第4d才出現(xiàn)污染,污染率低;抑制菌滋生效果最差的是第l、2、5、9、10、11、12、17、18組,接種第3d出現(xiàn)大量污染,累計污染率為100%。
2.3抗生素對材料滅菌效果的影響根據(jù)第11、12組與第2組滅菌措施的比較,兩組培養(yǎng)基完全相同,第11組用了單獨(dú)青霉素滅菌,而第12組采用青霉素,鏈霉素混合液處理,其他滅菌藥劑,濃度,處理時間均相同。結(jié)果表明,第12組材料滅菌效果略優(yōu)于第2、11組,第13和14與第3組,,第15和16與第4組,19和20與第5組,21和22與第6組,23和24與第7組比較又同樣得出以上結(jié)論。說明青霉素,鏈霉素混合液對外植體滅菌有一定的積極作用,比不用或單獨(dú)用青霉素滅菌效果好。
小結(jié)與討論
根據(jù)上述的研究結(jié)果,對魚腥草組培中無菌培養(yǎng)系建立的具體技術(shù)措施總結(jié):(1)對魚腥草對外植體莖段滅菌效果最佳的處理措施為:外植體+70%酒精30s+0.1%升汞10一12min+青霉素+鏈霉素15min;(2)青霉素和鏈霉素混合液浸泡外植體有一定的滅菌效果,比單獨(dú)用青霉素滅菌效果好。青霉素和鏈霉素混用對菌類滋生的抑制效果好,比單用青霉素對菌類滋生的抑制效果強(qiáng)。(3)魚腥草的外植體莖用升汞滅菌的滅菌效果及對菌類滋生的抑制效果比用10%次氯酸鈉處理效果好。
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