試驗方法
    2.1野菊嫩莖的選擇
    試驗材料在2007年10月29日上午10:00采取。選生長健壯無病蟲害的野菊植株，從新分生的枝條上剪取幼嫩帶尖莖部15cm左右，作為外植體使用。
    2.2野菊嫩莖的處理
    將剪取的嫩莖帶回實驗室，將莖上的葉片連帶葉柄一同剪掉，但葉柄基部留下5mm以保護側(cè)芽，避免側(cè)芽在滅菌過程中受損。將去掉葉柄的嫩莖剪成長約2cm左右的小段。放在臉盆中用流水沖洗約5min，再用稀釋的洗潔精漂洗約10min，最后用流水洗凈，放入滅過菌的三角瓶中以待滅菌。滅菌時，將75%的酒精倒人盛有嫩莖小段的三角瓶，接著倒出進行表面滅菌，而后用0.1%的升汞溶液滅菌3min，最后用無菌水沖洗3一4次，在超凈工作臺上將其接種于培養(yǎng)基上。

    2.3培養(yǎng)基的選擇
    由于野菊花同觀賞菊花同科同屬，據(jù)資料介紹，用于菊花培養(yǎng)的培養(yǎng)基有：MS、White、N6、B5等，一般采用MS為基本培養(yǎng)基，添加各種激素進行培養(yǎng)圖。誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS十BA1mg/L+NAA0.lmg/L,pH為5.8左右，培養(yǎng)的溫度范圍是24一26℃，光照強度是1500一3000lx，每天照光約12h。繼代培養(yǎng)基為MS或MS+BA0.2mg/L十NAA0.5mg/L的培養(yǎng)基上。生根培養(yǎng)基為1/2MS十NAA0.1mg/L。另外，各培養(yǎng)基中均加瓊脂粉5.5g/L，蔗糖30g/L.
    2.4組培苗練苗
    將瓶苗移出培養(yǎng)室，放在準(zhǔn)備室內(nèi)，打開瓶口封口，將瓶苗室溫放置2一3d后，進行移栽。將實驗田翻耕，使耕作層土層疏松，整理出畦。在土壤上面鋪一層約5cm的蛙石，澆透水。將小拱棚支架搭好備用。將雙斜面小棚打成屋脊?fàn)罨蛉切危芭锬媳弊呦?，中間設(shè)一條拉桿，可起到堅固抗風(fēng)的作用閣。一般棚內(nèi)相對濕度可達70%~100%，白天通風(fēng)時，棚內(nèi)相對濕度可保持在40%一60%；夜間密閉時可達到90%以上。棚內(nèi)地溫比露地高5一6℃，有利于再生苗的生長和提高再生苗成活率。當(dāng)瓶苗根長至2cm左右時，用鑷子輕輕取出，用流水將瓶苗根部的培養(yǎng)基沖洗干凈，然后栽在準(zhǔn)備好的蛙石中，隨后用噴壺澆一遍透水，將棚膜罩上，以水壓邊。白天氣溫過30℃時用遮陽網(wǎng)遮蔭。馴化過程中通過通風(fēng)、遮蔭、灑水使棚內(nèi)溫度白天保持在25℃左右。待白天氣溫穩(wěn)定在28℃以上，生了新根約3cm時，可去膜移栽。
    3、結(jié)果與分析
    3.1野菊嫩莖側(cè)芽的誘導(dǎo)及生長狀況
    接種后第2天，野菊嫩莖外觀呈嫩綠色，水漬狀，與滅菌前無異。未發(fā)現(xiàn)染菌。第3天野菊嫩莖體表有針尖般小黑點，極少部分腋芽已開始萌動，部分葉柄有于枯現(xiàn)象，未發(fā)現(xiàn)染菌。第4天大部分野菊嫩莖體表水漬狀消失，留有頂芽和側(cè)芽的飽滿嫩莖上的芽開始生長。部分葉柄短的嫩莖上部有褐色水漬狀現(xiàn)象，這部分芽未萌發(fā)。第5天野菊嫩莖體表水漬狀消失，葉柄大部分干枯，側(cè)芽萌發(fā)在90％以上，大小如小米粒的一半，莖尖幼葉有展開跡象。第6天野菊嫩莖莖尖幼葉已展開，側(cè)芽大部分萌發(fā)。第8天后多數(shù)芽已展開，莖段上黑點明顯。第9天幼芽生長良好，但展開的葉片邊緣有焦枯現(xiàn)象。第10天后部分莖尖呈水漬狀，生長好的，葉片已完全展開，翠綠，葉面干燥。大部分芽生長良好，部分抽出了嫩枝（注：黑點為滅菌過程中升汞對其體表的損害；繼代轉(zhuǎn)接一次，培養(yǎng)基為MS+BA0.2mg/L+NAA0.5mg/L）。
    3.2野菊嫩莖的繼代增殖培養(yǎng)
    當(dāng)莖尖及腋芽萌發(fā)生長，長到距離瓶口約1cm，即高約6~7cm時可進行增殖培養(yǎng)。嫩莖生長一段時間后，下部可分化出大如黃豆的棕褐色組織，但芽少有分化。將嫩莖上誘導(dǎo)萌發(fā)的腋芽切成數(shù)段，每段帶1芽1葉，進行短枝接種增殖培養(yǎng)。將其基部插人MS或MS+BA0.2mg／L十NAA0.5mg/L的培養(yǎng)基上，約4周后腋芽長成小植株。
    3.3瓶苗的誘導(dǎo)生根
    野菊繼代長成的小植株部分被轉(zhuǎn)人生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA0.lmg/L，部分繼續(xù)增殖培養(yǎng)MS十BA0.2mg/L+NAA0.5mg/L。5d后，有少部分瓶苗其根長至2mm，部分還處于根原基狀態(tài)，只有小突起，大部分還是未萌動的。株高有所增加但不太明顯。葉色黃綠，有些小葉已經(jīng)干枯，但整體長勢較好；8d后，絕大部分已生根約2mm，其葉色開始轉(zhuǎn)綠，整體長勢較好；9d后，有少部分瓶苗根的長度已長至lcm，大部分在0.5~0.7cm左右，株高無大的變化，但其粗度明顯增加，葉色由黃綠轉(zhuǎn)為綠色，長勢較好。
    3.4組培苗練苗
    練苗的野菊再生苗長勢很好，僅在1周左右即長出新根。2周后其葉色濃綠，莖稈呈紫褐色或嫩綠色，粗壯。這時可進行移栽。
    4、結(jié)語
    該研究發(fā)現(xiàn)以野菊的嫩莖作為外植體進行組織培養(yǎng)，培養(yǎng)基要求不苛刻，誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)及生根培養(yǎng)均可成功操作。并且瓶苗的練苗也非常成功，說明野菊再生根的能力很好。通過試驗了解到，野菊的嫩莖可進行組織培養(yǎng)，而且見效快，為野菊的快速養(yǎng)殖開辟了廣闊的前景。