革葉蕨（Rum ohra adiantiform is）是三叉蕨科(A spidiaceae)革葉蕨屬(R um ohra)多年生植物，葉深綠，羽狀分裂，革質(zhì)。近年來已成為世界性新興的切葉植物，具有很大的開發(fā)價(jià)值和發(fā)展?jié)摿Α?br />
    在傳統(tǒng)栽培中，蕨類主要通過分株養(yǎng)殖或孢子養(yǎng)殖方法進(jìn)行。分株養(yǎng)殖效率低、速度慢、養(yǎng)殖系數(shù)小，且長期采用這種無性養(yǎng)殖方法，會(huì)使生理性葉枯病發(fā)生嚴(yán)重，導(dǎo)致種系退化，產(chǎn)量和品質(zhì)下降；孢子養(yǎng)殖對(duì)環(huán)境條件和技術(shù)條件要求高，周期長，而且變異大，很難保持原有的優(yōu)良性狀，因此種苗繁育緩慢。利用組織培養(yǎng)方法獲得再生植株，并在短時(shí)間內(nèi)快速養(yǎng)殖，獲得大量組培苗是解決這一問題的公認(rèn)有效途徑。
    但是具體采取什么組織或器官則要取決于培養(yǎng)體系的目的和所涉及到的植物種類，同一種植物不同的組織和器官其再生能力也有很大差異[1]。有研究表明：利用波士頓蕨未展開新葉的葉尖作外植體[2]，可獲得愈傷組織，誘導(dǎo)出叢生芽，培育成完整植株；用蕨[Pteridium aquilium (L.)Kuhn]帶頂芽或不帶頂芽的幼嫩根狀莖[3]，得到GGB分化出苗；王彭偉利用腎蕨走莖不同部位接種在MS+IAA 0.5m g/L+NAA 0.1mg/L 培養(yǎng)基上GGB (綠色球狀體)及器官誘導(dǎo)[4]。本試驗(yàn)通過比較不同部位在外植體M S+IAA0.5mg/L+ NAA0.1mg/L 培養(yǎng)基上的脫分化程度來研究革葉蕨分化能力最強(qiáng)的外植體類型。
    1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    試驗(yàn)材料為培養(yǎng)中已經(jīng)轉(zhuǎn)綠并生長一致的革葉蕨無菌莖尖、莖段和幼葉。
    1.2 試驗(yàn)方法
    1.2.1 不同類型外植體脫分化能力的比較。革葉蕨無菌莖尖、莖段和葉片接種在MS+IAA0.5mg/L+NAA0.1mg/L[5]培養(yǎng)基上，每處理各接種20瓶，1個(gè)外植體/瓶，60天后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)愈傷組織數(shù)量。
    愈傷組織誘導(dǎo)率（% ）=（誘導(dǎo)出愈傷組織的外植體數(shù)/接入外植體數(shù)）×100% 。
    1.2.2 不同來源愈傷組織分化能力的比較。愈傷組織形成以后，將分別來自莖尖、莖段和葉片的不同來源的愈傷組織轉(zhuǎn)接到MS+IAA0.5mg/L+NAA 0.1mg/L 培養(yǎng)基上，每處理各接種20瓶，1個(gè)外植體/瓶，分別于45天、60天觀察并統(tǒng)計(jì)芽分化數(shù)量、成芽率。成芽率（% ）=（分化不定芽的外植體數(shù)/接入外植體數(shù)）×100%
    2 結(jié)果與分析
    2.1 不同類型外植體脫分化能力的比較從表2-1 可以看出，莖尖和莖段誘導(dǎo)愈傷即脫分化能力均較強(qiáng)，其中莖尖和莖段愈傷誘導(dǎo)率達(dá)到100% ，而葉片的誘導(dǎo)率較低。但在平均愈傷數(shù)量指標(biāo)上葉片和莖尖均較高。
    莖尖接種后20天左右頂端膨大，逐漸產(chǎn)生一團(tuán)GGB（即綠色球狀物），其上有針尖狀的小突起，以后逐漸形成愈傷組織。莖段和葉片出現(xiàn)愈傷組織較慢，在培養(yǎng)30天后切口處先形成少量瘤狀結(jié)構(gòu)，40天后切口處形成愈傷組織，其中葉片在與葉柄相連的切口處更易產(chǎn)生愈傷組織，而較細(xì)小的上部或邊緣葉片接種后大多褐化，誘導(dǎo)愈傷組織能力弱。因此，除莖尖和莖段外，采用合適部位的葉片也是誘導(dǎo)愈傷的選擇。
    2.2 不同來源愈傷組織分化能力的比較三種外植體均可不同程度的分化出芽，愈傷組織形成45天后可分化出羽狀葉，產(chǎn)生叢生苗.從表2-2可看出，莖尖形成愈傷的分化能力最強(qiáng)，愈傷平均成芽數(shù)和成芽率最高，從總體上講，離體組織在此條件下器官分化能力的強(qiáng)弱順序?yàn)椋呵o尖> 葉片> 莖段。
    3 討論
    植物利用組培技術(shù)進(jìn)行快速養(yǎng)殖多采用M urashige[6]提出的工廠化生產(chǎn)方法，即通過誘導(dǎo)不定芽以及提高腋芽的發(fā)生而增加其數(shù)量。在組培過程中，其增殖途徑在于GGB 的誘導(dǎo)和繼代增殖。GGB的結(jié)構(gòu)與愈傷組織不同，而與蘭花的原球莖相似[7]。與誘導(dǎo)形成不定芽進(jìn)行增殖相比，用誘導(dǎo)形成GGB的方法大大提高了養(yǎng)殖增生的效率。
    在試驗(yàn)中，革葉蕨走莖莖段作為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)同樣可以誘導(dǎo)產(chǎn)生GGB，以后GGB 可以再分化，但與莖尖組培相比，莖段上產(chǎn)生GGB的數(shù)量極少，速度也慢得多。
    參考文獻(xiàn)：
    [1] 鄭加協(xié)，李華東，甘勇輝。蜜寶菠蘿組織培養(yǎng)及低成本快繁技術(shù)研究[J]。果樹學(xué)報(bào)，2005。
    [2] 曾宋君，華南植物園中的蕨園。植物雜志，2000。25- 26。
    [3] 蘇建宇，王俊，李吉寧，梁文裕，華振基。蕨的組織培養(yǎng)[J]。植物生理學(xué)通訊，1996，(05)：361。
    [4] 王彭偉，腎蕨組織培養(yǎng)快速養(yǎng)殖的研究[J]。北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，20(2)：108。
    [5] Marco A. Cordoba. micropropagation of Rumohraadiantiformis [J]. Journal of Forestry Research,2002,13(1)：41- 54。劉瑞林，王鳳彬；任如意。蕨類植物組織培養(yǎng)研究現(xiàn)狀。中國林副特產(chǎn)，2003，(02)：16- 17。
    [6] Murashige T, et al. A revised medium for rapidgrowth bioassays with tobacco tissue culture [J].Physiol Plant, 1962,15：473- 479。
    [7]譚文澄，戴策剛。觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M]。北京：中國林業(yè)出版社，1991.127。