摘要：目的：研究藥用植物萱草的組織培養(yǎng)技術(shù)。為工廠育苗提供科學(xué)依據(jù)。方法：以萱草的幼嫩花梗為外植體，采用MS培養(yǎng)基，附加不同的植物激素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方是MS+6-BA1.0mg·L+NAA 0.1 mg·L，不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方是MS+6-BA 1.0 mg·L+NAA 0.1 mg·L，不定根誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方是1/2MS+IBA 0.1 mg·L+NAA 0.1 mg·L。結(jié)9k：以幼嫩花梗為外植體。通過誘導(dǎo)愈傷組織途徑可以達(dá)到快速養(yǎng)殖的目的。 　關(guān)鍵詞：萱草；組織培養(yǎng)；植株再生。中圖分類號(hào)：R285.5

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 　文章編號(hào)：1673-7717(2007)12-2552-02
    萱草Hemerocallis fulva L.系百合科(Liliaeea)多年生草本植物，以根及根莖入藥，為我國傳統(tǒng)中藥“萱草根(Ra-dix Hemerocallis)”，具有清熱涼血、利尿通淋的功效，用于治療水腫、小便不利、淋濁、帶下、黃痘、便血、崩漏等癥。近年來研究表明萱草根中含有多種蒽醌類和二氫呋喃-γ-內(nèi)酰銨類化合物，這些成分具有抗菌、抗癌、殺蟲等生物活性。
    萱草不僅具有藥用價(jià)值，還具有蔬菜食用和花卉觀賞價(jià)值。其花經(jīng)過加工后是頗負(fù)盛名的“黃花菜”、“金針菜”，營(yíng)養(yǎng)豐富，且具有保健益壽之功。而其觀賞價(jià)值體現(xiàn)在萱草花秀美俊俏、雅而不俗、人見人愛，令人歡喜，解憂忘愁，是“中國的母親花”、“忘憂草”。以往報(bào)道的萱草組織培養(yǎng)的文章，是基于觀賞花卉品種的快速養(yǎng)殖技術(shù)的實(shí)驗(yàn)研究，而在藥用和食用方面缺乏思考和實(shí)踐。因此，作者借鑒這些研究成果，對(duì)藥用植物萱草開展了組織培養(yǎng)技術(shù)方面前期實(shí)驗(yàn)工作，期望為進(jìn)一步研究其藥材質(zhì)量以及開發(fā)中藥功能保健類蔬菜奠定基礎(chǔ)。
    1.材料與方法
    1.1材料。供試植物材料采自北方國家級(jí)林木種苗示范基地栽培的生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的帶花萱草植株，經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院中藥資源學(xué)教研室劉長(zhǎng)利博士鑒定為H.fulva，外植體為萱草的幼嫩花梗。
    1.2方法。①無菌外植體的獲得：將外植體先用毛刷蘸洗滌劑洗凈，再用流水沖洗干凈。在無菌條件下用75％的酒精消毒30s，再用0.1％的HgCl溶液浸泡5min，最后用無菌水沖洗6～8次，在無菌條件下切成1～1.5cm長(zhǎng)的小段進(jìn)行接種。②培養(yǎng)條件：培養(yǎng)條件為MS培養(yǎng)基，附加0.6％瓊脂，pH5.8。培養(yǎng)室溫度為(25±2℃，光照12h·d，光照度為20001x。
    2.結(jié)果與分析
    2.1激素對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響　將萱草幼嫩花梗分別接種于含有不同激素配比的1～6號(hào)培養(yǎng)基(蔗糖濃度為3％)中。培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)各處理愈傷組織誘導(dǎo)情況。結(jié)果見表1和圖1。
    由表1可以看出，植物激素濃度越高越容易誘導(dǎo)出愈傷組織，但當(dāng)細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素濃度達(dá)到1：0.05時(shí)，愈傷組織色淺不易分化芽，而且玻璃化嚴(yán)重；當(dāng)細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素比例小時(shí)，愈傷組織分化率也降低，試驗(yàn)結(jié)果表明誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基配方是MS+6-BA 1.0 mg·L+NAA 0.1mg·L，所誘導(dǎo)出的愈傷組織黃綠色，且表面有突起的芽點(diǎn)。
    2.2激素對(duì)不定芽分化與繼代增殖的影響　將誘導(dǎo)出的愈傷組織轉(zhuǎn)接到含有不同激素配比的4～7號(hào)培養(yǎng)基(蔗糖濃度為3％)中，培養(yǎng)1個(gè)周期后觀察其生長(zhǎng)情況，結(jié)果見表2和圖2。
    由表2可見，細(xì)胞分裂素6～BA濃度在0～1.0mg·L之間均能誘導(dǎo)出不定芽(圖2所示)，隨著其濃度的增高，誘導(dǎo)出的芽數(shù)增加，苗子相應(yīng)變細(xì)弱。研究結(jié)果表明：隨著繼代次數(shù)的增加，較高濃度的細(xì)胞分裂素6-BA，容易引起玻璃化，苗子不健壯。在生產(chǎn)過程中隨著繼代次數(shù)的增加應(yīng)逐步降低細(xì)胞分裂素的濃度，直至為零。
    2.3激素對(duì)不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響　經(jīng)過一段時(shí)間的繼代培養(yǎng)后，將叢生芽切分成帶小量愈傷的單株轉(zhuǎn)到含有不同激素配比的8～10號(hào)培養(yǎng)基(蔗糖濃度為2％)中。半月后觀察其生根情況，結(jié)果見表3和圖3。
    由表3可見，萱草組培苗生根較容易。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：誘導(dǎo)不定根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基配方是1/2MS+NAA 0.1mg·L+IBA 1.0mg·L。經(jīng)過8～10天后開始長(zhǎng)出乳白色星狀根(如圖3所示)，至15天時(shí)，生根率最高可達(dá)99.5％。
    2.4組培苗的移栽 當(dāng)組培苗根長(zhǎng)至1cm時(shí)，將培養(yǎng)瓶放在自然光照下煉苗3～5天后，打開瓶蓋再煉苗3～5天，輕輕取出組培苗，洗凈培養(yǎng)基后，移栽到經(jīng)0.1％KMnO溶液消毒過的基質(zhì)中，保持一定的溫度和濕度，馴化成活率可達(dá)95％以上，2周后待長(zhǎng)出新葉即可移栽到苗圃，移栽成活率可達(dá)100％。
    3.討論
    萱草一般采用分蘗方式進(jìn)行增殖，1株萱草每年僅可養(yǎng)殖4～5株，難以適應(yīng)市場(chǎng)商品化生產(chǎn)的要求。本文通過對(duì)萱草的組織培養(yǎng)和植株再生的實(shí)驗(yàn)研究，建立了以萱草幼嫩花梗為外植體、誘導(dǎo)愈傷組織、不定芽分化、生根培養(yǎng)及煉苗移栽的技術(shù)體系，該技術(shù)取材容易，消毒簡(jiǎn)便，移栽成活率高，是加快養(yǎng)殖速度的有效途徑，為工廠化育苗提供了科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為進(jìn)一步研究其藥用成分含量、開發(fā)中藥功能保健類蔬菜奠定了基礎(chǔ)。