石斛蘭,蘭科植物之一,主要分布于亞洲熱帶和亞熱帶,澳大利亞和太平洋島嶼,我國大部分分布于西南、華南、臺灣等地。石斛蘭的主要品種有金釵石斛、密花石斛、鼓槌石斛等??扇胨?,名為石斛,對人體有驅(qū)解虛熱,益精強陰等療效。隨著花卉產(chǎn)業(yè)的興起,石斛蘭也成為了一種觀賞植物。石斛蘭的栽培方式一般為盆栽。由于石斛蘭具有秉性剛強、祥和可親的氣質(zhì),被譽為父親之花。石斛蘭的植株由肉莖構(gòu)成,粗如中指,葉如竹葉花葶從葉腋抽出,每葶有花七八朵,每花6瓣,四面散開,花瓣邊均為紫色,瓣心為白色。
石斛蘭無菌播種與組織培養(yǎng)
無菌播種
石斛蘭的種子極為細小,胚胎發(fā)育不完全,所謂的胚實際上就是一團未分化的胚細胞,且無胚乳組織,在自然狀態(tài)下發(fā)芽率極低,只有與蘭菌共生才能少量發(fā)芽,成苗更難,因此不能像其他植物一樣在大田或苗床上播種,只有在無菌的補充營養(yǎng)的人工培養(yǎng)基上,促進其萌發(fā)成苗。
1、種子的采收與播種
應用于無菌播種的石斛蘭的種子的果實以剛成熟但尚未開裂時效果較好,未成熟時能發(fā)芽,但發(fā)芽率略低,而如果果實成熟開裂,種子難以收集與消毒,且種子發(fā)芽力降低。種子采收后宜即采即播,否則會影響發(fā)芽率,未來得及播時,應用密封的塑料袋裝好放入4℃的冰箱中保存,但時間不宜過久,否則易長霉或降低發(fā)芽率。
在進行無菌播種操作時,可采用如下步驟:
(1)無菌播種一般在超凈工作臺上進行,在操作前準備好所有的藥劑和工具,保持超凈工作臺的無菌狀態(tài)。
(2)石斛蘭果實一般在成熟未開裂前采收,對于雜交不親和的種類可采取未成熟的果實,采收后先將果實表面的臟物沖洗干凈,將上下兩端切除。
(3)將果實置于75%乙醇中浸10~15秒,再在5%~10%漂白粉溶液中、或0.1%的升汞溶液中、或3%的雙氧水,或5%的安替福民溶液中浸5~20分鐘,以無菌水沖洗數(shù)遍。
(4)用無菌濾紙擦干后,再用解剖刀切開果實,里面的黃色粉狀物即為石斛蘭種子。
(5)用鑷子輕輕將種子取出播于培養(yǎng)基中。
(6)播種后稍加搖動,使種子均勻散布于培養(yǎng)基中,但要避免將種子埋入培養(yǎng)基內(nèi),引起窒息死亡。播種密度以每瓶的種子數(shù)量以大致都能接觸到培養(yǎng)基為度,太密時會影響發(fā)芽率及發(fā)芽后的正常生長。如果果實在采收前已經(jīng)開裂,也可用上述同樣的方法處理,若種子不下沉,可加幾滴濃酒精。種子消毒后,用無菌水沖洗數(shù)遍,再用濾紙過濾的方法除去溶液,取出種子用于接種。
(7)將播種后的玻璃瓶移入培養(yǎng)室或培養(yǎng)箱中或有散射光的地方,培養(yǎng)溫度20℃~26℃,溫度過高易褐變死亡,溫度過低發(fā)芽慢。
(8)1周左右,胚明顯增大,補充2000~3000勒克斯的光照,每天10~18小時效果較好。接種后1~2種子變成綠色,表明胚上已生成葉綠素,1個月左右種胚突變種皮,長成頂端有綠色的葉原基,球體基部有絲狀毛的原球莖。在播后的2~3個月,第一枚葉片從原球莖頂部中間生出。在出現(xiàn)2~3片葉時,原球莖伸長,并且有第一條根生出。在播種后4~5個月,較大的苗可出盆移栽于小盆中。較少的苗轉(zhuǎn)移到相同培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。
(9)如果播種較密,通常在長出第一枚葉片時就分瓶,分瓶后以蘭花專用培養(yǎng)瓶效果最好,一般每瓶幼苗保持20株左右為佳。在播種后3個月,將其移入另外的培養(yǎng)基中,加大生長空間,形成能用于栽培的植株。
(10)當石斛蘭小苗長到3cm~5cm、有2~3株較好的根時,可將幼苗移出培養(yǎng)瓶,栽植到盆中。小苗從培養(yǎng)瓶中取出后,要輕輕用水清洗根部的培養(yǎng)基,栽培介質(zhì)宜用切碎的苔蘚、泥炭、碎木炭和少量砂配成的培養(yǎng)土,將小苗栽在小盆中,每盆3~5株。而后放在25℃左右的溫室內(nèi),保持較高的空氣濕度和較強的散射光。每周施一次液體肥料,并噴灑抗菌劑,1個月后可移至光線較強的地方。
(11)隨著植株的長大要及時換盆,并移入溫室栽培。
(12)石斛蘭播種苗一般在出瓶后,2~3年左右能開花。
2、培養(yǎng)基的選擇
石斛蘭的播種培養(yǎng)基多種多樣,不同的品種的最適培養(yǎng)基不同,比較常用的基本培養(yǎng)基有MS、改良MS、Nistch、N6、RE等。播種培養(yǎng)基中一般不需加激素就能萌發(fā),但有些品種在加入低濃度的6-BA、椰子汁、香蕉汁時,能提高萌發(fā)率,并加快萌發(fā)速度和生長速度。
培養(yǎng)基的配制
首先要根據(jù)培養(yǎng)基配方,算好母液吸取量,并按順序吸取,然后加入蔗糖溶液,并加入蒸餾水定容至所需體積,并用0.1mol/L的HCl或NaOH調(diào)整pH值(pH5.5~5.8),加入瓊脂加熱熔化,配制好的培養(yǎng)基要趁熱分注,倒入試管、三角瓶或其它玻璃瓶等培養(yǎng)器皿中,一般至容器1/4~1/5左右,最后加塞或封口準備消毒。目前,為了運輸方便,一些試管苗工廠已采用一次性的聚脂纖維袋。
3、培養(yǎng)基的消毒
由于培養(yǎng)基內(nèi)有豐富營養(yǎng)物質(zhì),極適合細菌和真菌的養(yǎng)殖,造成污染,影響組培的成功,因此培養(yǎng)基消毒是必不可少的一個環(huán)節(jié)。消毒的方法一般有高溫高壓消毒和過濾消毒兩種方法。
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